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细胞骨架蓝色荧光探针(ActinBlue)是F-肌动蛋白的高亲和力探针，由蘑菇毒素制成，与蓝色荧光染料偶联。以纳米摩尔浓度使用时，鬼笔毒素是方便的探针，可用于对甲醛固定和打孔的组织切片、细胞培养物或无细胞实验体系中的F-肌动蛋白进行标记、鉴别和定量，比抗体染色更优越。最适合于固定和通透的样本。

1. 甲醛固定细胞
   
   1. 以预温的PBS，pH7.4，洗涤细胞两次。
      
   2. 3.7%甲醛(用PBS配置)固定细胞，室温10分钟。注意：甲醇可能导致肌动蛋白扭曲变形，因此最好避免选用任何含有甲醇类的固定剂。
      
   3. PBS洗涤两遍。
      
   4. 丙酮-20℃洗涤细胞或者含0.1% Triton X-100的PBS洗涤3～5分钟，以增加渗透性。
      
   5. PBS洗涤两遍。
      
   6. (选做)在染色之前，也可以选择用1%BSA的PBS预孵育固定的细胞20～30min，以减少非特异性背景。
      
   7. 取5μL荧光探针原储液加入200μL的含1%BSA的PBS中预染色每张细胞爬片。
      
   8. 选择合适的染色液体积，建议100μL，室温浸泡爬片20分钟，可以加上封盖，防止水分蒸发。
      
   9. PBS洗涤两遍。
      
   10. 使用DAPI通道观察即可。如需长期保存，细胞应在空气中晾干，加盖在一个永久封固封片剂。避光2～6℃，以这种方式制备的试样保持至少6个月的肌动蛋白染色。
2. 同时进行固定、促渗和罗丹明鬼笔环肽染色
   该荧光探针在4%的多聚甲醛固定缓冲液中稳定时间较短，需要快速的固定、透化和标记。
   
   1. 制备1mL含有50～100μg/mL的1-十六酰-sn-丙三醇-磷酸胆碱和3.7%的甲醛的PBS溶液，然后添加5～10units的荧光探针。
      
   2. 染色液没过细胞，4℃孵育20分钟。
      
   3. 缓冲液快速洗涤三次。
      
   4. 封片观察。